Росдистант. Биотехнология. Лабораторная работа 1

В демо-файлах представлены полные условия заданий.

Прошу перед скачиванием посмотрите демо-файлы!

Биотестирование растворенных токсических веществ по росту отрезков колеоптилей пшеницы 

Цель: разработать энерго- и ресурсосберегающую модификации метода.

1. Представить выполненные задания в письменном виде.

Алгоритм выполнения:

1.        Изучить теоретический материал по теме занятия.

2.        Выполнить задания с решением контрольных задач.

Контрольные задачи:

1.                 Провести расчет всех ингредиентов, представленных в заданиях.

2.                 Изучив методики, разработать энерго- и ресурсосберегающую модификации.

Оборудование, реактивы, материалы:

1) термостат; 2) кюветы; 3) пинцет; 4) вата; 5) фильтровальная бумага; 6) пленка; 7) бритвы; 8) предметные стекла; 9) пенициллиновые бутылочки с пробками; 10) чашки Петри; 11) пипетки на 1-5 мл; 12) карандаш по стеклу; 13) миллиметровка; 14) испытуемые вещества: вода, исходный раствор гербицида; 15) 2%-ный раствор сахарозы; 16) семена пшеницы.

При индивидуальной работе можно использовать для нарезки отрезков колеоптилей специальный станочек, в котором выточены бороздки для укладывания ростков. Уложенные ростки зажимают с двух сторон резинками. Затем в поперечные бороздки, сделанные через 5 мм, вставляют бритву и нарезают очень быстро 10-12 штук отрезков колеоптилей. При нарезке можно использовать специальный резачок. При отсутствии резачка используют миллиметровку, покрытую стеклышком, и бритву.

Предварительная работа

До проведения практического занятия необходимо подготовить ростки пшеницы. Для этого хорошо всхожие семена замочить на 18-20 часов в воде, а на другой день разложить пинцетом в кюветы зародышем вверх и в одном направлении на слой мокрой ваты (2-3 см), на которую поместить два слоя фильтровальной бумаги. Вату увлажнить до полной влагоемкости, что легко регулировать, сливая осторожно излишки воды через край кюветы. Кювету закрыть пленкой, подгибая ее края под дно кюветы, а затем поставить в термостат при температуре 25-27° С зародышами на север, что обеспечивает более ровное прорастание.

Проростки прорастить до среднего размера 1,5—2,5 см (не более), так как большие проростки теряют чувствительность. Для установления нужного времени замачивания и проращивания предварительно провести пробные работы, т. к. на эти процессы влияют многие переменные: сорт пшеницы, всхожесть, размеры семян и время года.

Ход выполнения работы:

1. Из исходного раствора гербицидов или других испытуемых веществ приготовить серию растворов на 2%-ной сахарозе методом последовательного разбавления. Последний из растворов должен быть ниже ПДК (для гербицидов меньше 10"6%).

2. Сделать вытяжку из почвы: 10 г растертой почвы залить 25 мл дистиллированной воды, сильно взболтать 10-15 мин, отстоять, отфильтровать через воронку. Можно также взять для биотестирования воду реки, водохранилища.

3. Ростки пшеницы срезать у основания бритвой или пинцетом с заточенными кончиками, сложить в чашку Петри.

4. Используя миллиметровку и предметное стекло, разделить колеоптили на фракции: 1,5-2 мм, 2-2,5 мм и работать на преобладающей фракции.

5. От колеоптиля бритвой отсечь кончик 0,5 мм, вырезать следующие 5 мм - зону растяжения, и поместить на 10-15 мин в чашку Петри с дистиллированной водой для удаления ауксинов и лучшей реакции на испытуемое вещество.

6.Через указанное время 10-15 мин вырезанные зоны колеоптилей поместить (по 10 шт.) в пенициллиновые бутылочки с испытуемым раствором, которые закрыть резиновыми пробками. Повторность опытов - трехкратная.

7. Пенициллиновые бутылочки осторожно повернуть набок, отрезки колеоптилей расправить так, чтобы они все плавали в растворе. В таком состоянии их поместить в термостат при температуре +25°С - +26°С на 2-3 дня (в учебных целях - на неделю).

8. Через 2-3 дня снять результаты измерения длины отрезков колеоптилей. Рост их на чистой 2%-ной сахарозе принимается за контроль (100%), реакция же на испытуемые растворы подсчитывается относительно контроля.

9. Построить гистограмму ингибирования (а в отдельных случаях и стимулирования) роста отдельными токсическими веществами, или их смесями (вытяжка из почвы, вода) в разных разведениях.

10. Сделать выводы о токсичности испытуемого вещества или воды.