Проект по клонированию по предмету генная инженерия

Плазмида pJET1.2 - удобный вектор для эффективного клонирования по тупым концам. Он коммерчески-доступен, продаётся в линеаризованном виде (по сайту EcoRV) и не может лигироваться сам на себя.

Вам требуется придумать такой вариант генетической конструкции, при котором в плазмиду pJet1.2 будет лигирован какой-то фрагмент ДНК, благодаря чему плазмиду можно будет размножить в клетках и который можно легко удалить, получив первоначальную линеаризованную плазмиду pJet1.2. Кроме того, после удаления добавленного фрагмента необходимо легко разделять первоначальную плазмиду и вставку для хорошей очистки вектора.

Нужно получить:

1. Карта финальной плазмиды.

2. Подробный протокол клонирования (какие методы клонирования используем и в какой последовательности, как проверить успешность клонирования).

3. Протокол вырезания вставки и получения очищенной линеаризованной плазмиды pJET1.2.

Ответьте на вопрос:

1. Почему плазмида изначатьно не может залигироваться сама на себя? Для чего это необходимо?