Создать конструкцию для получения интерлейкина-1 бета (ИЛ-1?) человека путем экспрессии в E.coli.

Создать конструкцию для получения интерлейкина-1 бета (ИЛ-1?) человека путем

экспрессии в E.coli.

Исходные данные:

Ген ИЛ-1? - https :// www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/M15330.1

В качестве дополнительной последовательности, облегчающей очистку,

использовать пептид WSHPQFEK (Strep-tag).

В качестве линкера использовать сайт для расщепления фактором свертывания

крови Xа.

Вектор pET-9d (найти на сайте https://www.snapgene.com/)

1 .Изучить карту вектора, определить основные структурные элементы, необходимые

для экспрессии целевого белка.

2. Выбрать сайты рестрикции для вставки гена.

3. Сконструировать (запланировать) химерную последовательность (см. исходные

данные) для вставки в вектор по выбранным сайтам, провести ее проверку и

оптимизацию.

4. Предложить способ получения гена и праймеры для введения дополнительных

последовательностей и сайтов рестрикции.

5. Предложить способ отбора клонов E.coli, трансфецированных конструкцией с

целевым геном, а также способ проверки корректности вставки.

6. Указать метод, с помощью которого будет проводиться выделение химерного

белка.

7. Указать, как будет выделен ИЛ-1? из состава химерной последовательности.